Вассермана анализ

Техника

В образец крови или ликвора вводится антиген — кардиолипин из бычьегосердца. Сифилис-неспецифические антитела образуют реакцию с липидом — реакцию Вассермана антител антифосфолипида. Интенсивность реакции (1, 2, 3, или 4) указывает на серьёзность поражения.

Ингредиенты реакции

Ингредиенты реакции: антигены, испытуемая сыворотка, эритроциты барана, гемолитическая сыворотка, комплемент.

1) взвеси апатогенной культуры бледной трепонемы (водные, карболизированные, алкоголизированные); наибольшее применение получила взвесь культуральной трепонемы штамма Рейтера, обработанная ультразвуком (соникат);

2) протеиновая фракция (более чувствительна, чем полисахаридная и липоидная) из культуры трепонемы [д’Алессандро и Пуччинелли (G. D’ Alessandro, V. Puccinelli)];

3) взвеси патогенной тканевой трепонемы из пораженного яичка кролика, зараженного сифилисом. Предложение пользоваться специфическими антигенами исходило из представления о том, что RW основана на взаимодействии специфических антител с антигенами возбудителя.

К неспецифическим антигенам относят: 1) спиртовой экстракт из мышцы бычьего сердца (1 часть мышцы, 5 частей спирта с добавлением 0,25— 0,3% холестерина); 2) кардиолипиновый антиген [Пангборн (M.Pangborn), Л. С. Резникова и др.]; кардиолипин — очищенный экстракт из мышц бычьего сердца (фосфолипида — 0,0175%, лецитина — 0,0875%, которые проявляют активность при добавлении холестерина — 0,3%);

антиген отличается высокой чувствительностью, особенно при скрытых формах сифилиса; широко применяется в серодиагностике сифилиса во всем мире (в СССР его применение обязательно); 3) так наз. искусственные липоидные антигены, приготовленные из холестерина, лецитина и олеиновокислого натрия, оказались малопригодными; антигены, изготовленные из растительных веществ (ситолипины), не вошли в практику.

1) не вызывать гемолиза эритроцитов; 2) не инактивировать и не адсорбировать комплемент; 3) не образовывать с сывороткой здоровых лиц комплекса, способного адсорбировать комплемент; 4) при добавлении антигена в оптимальной дозе к сыворотке больных сифилисом образовывать комплекс, адсорбирующий комплемент.

Рис. 4. Схема реакции Вассермана (пояснение в тексте).

Испытуемая сыворотка по классической методике R W предварительно прогревается в водяной бане 30 мин. при t° 56° для инактивирования комплемента и стабилизации глобулиновых фракций.

Диагностическая ценность

При первичном сифилисе реакция Вассермана становится положительной на 6—8 неделе течения заболевания (в 90 % случаев), при вторичном сифилисе она положительна в 98—100 % случаев. Вместе с другими серологическими реакциями (РПГА, ИФА, РИФ) позволяет не только выявить наличие возбудителя, но и выяснить приблизительный срок заражения.

По этой реакции (помимо осмотра пациента и других лабораторных исследований) оценивается эффективность проводимого лечения. Материалом для анализа является кровь пациента, которая берется из вены. В процессе исследования крови происходит реакция связывания комплемента (РСК), позволяющая выявить наличие в крови антител к Treponema pallidum.

Методы постановки реакции

Ввиду того, что результаты реакции учитываются по отсутствию или наличию гемолиза после прибавления гемолитической системы, основным методическим требованием RW является применение точно оттитрованной дозы комплемента с таким расчетом, чтобы в случае адсорбции комплемента при взаимодействии испытуемой сыворотки с антигеном не остался излишек комплемента в количестве, достаточном для растворения эритроцитов, сенсибилизированных гемолитической сывороткой;

с другой стороны, доза комплемента не должна быть слишком мала, чтобы обеспечить гемолиз эритроцитов в случае отсутствия реакции между исследуемой сывороткой и антигеном. Поэтому перед постановкой основного опыта минимальная доза комплемента, вызывающая гемолиз при добавлении гемолитической системы, оттитровывается в присутствии антигена и нормальной сыворотки.

В основном опыте комплемент применяется с нек-рой надбавкой (не менее 15—30%). Каждый из 5 ингредиентов реакции (испытуемая сыворотка, антиген, комплемент, взвесь бараньих эритроцитов и гемолитическая сыворотка) применяется в одинаковом объеме (напр., по 0,25 мл). Для обеспечения оптимальных условий фиксации комплемента на образующемся комплексе в случае взаимодействия исследуемой сыворотки с антигеном смесь сыворотки, антигена и комплемента выдерживают в термостате в течение 45—60 мин. (1-я фаза реакции), после чего добавляют гемолитическую систему и пробирки вновь помещают в термостат (2-я фаза).

Одновременно ставят 3 контрольных опыта, в одном из которых антиген заменяется изотоническим раствором хлорида натрия, а в другом исключается исследуемая сыворотка, в третьем исследуется заведомо положительная по RW сыворотка. Учет реакции производится при наступлении гемолиза в контрольных пробирках основного опыта.

В зависимости от характера ингредиентов реакции, количественных соотношений между ними и условий проведения опыта различают следующие модификации RW.

схема RW

1. Количественные методы: а) постановка опыта с постоянными дозами сыворотки и комплемента и с разными дозами антигена; б) проведение опыта с повышающимися дозами комплемента; в) проведение опыта с постоянными дозами антигена и комплемента и с разными дозами исследуемой сыворотки: последний метод широко применяется в практике.

ПОДРОБНОСТИ:   Панавир Инлайт спрей: инструкция по применению, цена, отзывы, аналоги

2. RW при связывании на холоде — первая фаза реакции проводится при t° 2—4° в течение 18—20 час., что значительно увеличивает ее чувствительность (реакция Колмера, получившая особенно большое применение).

3. Активные методы реакции, которые основаны на использовании естественного комплемента или гемолизина, или того и другого, содержащихся в испытуемой сыворотке (Н. А. Черногубов, 1908; Н. В. Нарциссов, 1952). Наибольшее применение в СССР получили ускоренные активные методы постановки RW — реакция Григорьева — Рапопорта (см.

Григорьева-Рапопорта реакция), активная модификация Вайнштейна — Резниковой. В основу последней положен принцип использования естественного комплемента и гемолизина исследуемой сыворотки человека. Для выполнения реакции необходимы: активная (не прогретая при t° 56°) исследуемая сыворотка, не более 24-часовой давности;

два антигена разных серий (из обычно применяемых в RW), разведенные по утроенному титру, и 1% взвесь неотмытой дефибринированной крови барана. В три пробирки отмеривают по 0,2 мл активной испытуемой сыворотки: в первую и вторую пробирки — по 0,3 мл разведенных антигенов, а в третью (контрольную) — 0,3 мл изотонического раствора хлорида натрия.

а) с кардиолипиновым антигеном;

б) с цитохолевым антигеном и в экстренных случаях — микрореакция со свежей каплей крови.

Для объяснения механизма реакции Вассермана предложено несколько теорий. Амбоцепторная теория рассматривает R W как истинную реакцию иммунитета между антигеном и специфическими антителами сыворотки больного. По вопросу о характере взаимодействующих антигена и антител были высказаны различные мнения.

В основном считается, что речь идет об антигенах бледной трепонемы и соответствующих антителах. В антигенном составе бледной трепонемы обнаруживают не менее четырех антигенов: протеиновый, полисахаридный и два липоидных, один из двух последних специфичен для трепонемы, другой — из числа широко распространенных в природе.

В сыворотках больных удается дифференцировать три вида специфических антител (антипротеиновые, антиполисахаридные, антилипоидные) и реагины (белково-липоидные соединения, формирующиеся в ответ на липоидный антиген трепонемы, широко распространенный в природе). Этим объясняется возможность постановки RW с различными антигенами (специфическими и неспецифическими, водными и спиртовыми).

Физ.-хим. теория объясняет RW как результат изменений сыворотки у больных сифилисом, что характеризуется увеличением гамма-глобулиновой фракции, повышением концентрации водородных ионов, увеличением поверхностного натяжения и вязкости, уменьшением дисперсности коллоидов, лабильностью глобулинов ввиду ослабления связи с окружающей средой и в связи с этим легкой осаждаемостью их при добавлении антигена.

По-видимому, наиболее правильна концепция, что RW обусловлена иммунологическими и физ.-хим. факторами.

Наблюдающиеся при ряде болезней, при некоторых физиол, состояниях (беременность) и у здоровых лиц положительные R W побуждали изыскивать способы повышения ее специфичности. Были предложены реакции, исключающие или, наоборот, подтверждающие сифилитическую природу заболевания в спорных случаях [Нейрат (H.

Для подтверждения специфичности RW предложен ряд серореакций с применением в качестве антигена патогенной тканевой бледной трепонемы. К ним относятся: 1) реакция связывания комплемента с антигеном, который получают путем экстрагирования из вирулентных трепонем 0,2% раствором дезоксихолата натрия [Портной и Магнусон (J. Porthnoy, H.

Magnuson), 1955]; 2) реакция агглютинации, для к-рой вирулентную трепонему прогревают при t° 56° [Эрманн и Нильсен (G. Ehrmann, H. Nielsen), 1955]; 3) реакция иммобилизации Нельсона — Мейера (см. Нельсона-Мейера реакция), к-рая состоит в том, что вирулентная трепонема теряет свою подвижность в присутствии сифилитической сыворотки и комплемента;

тест Нельсона — Мейера отличается высокой специфичностью, но достаточно сложен; 4) реакция «прилипания» (Treponema pallidum immune-adherens test), сущность которой заключается в том, что вирулентная бледная трепонема, сенсибилизированная антителами сифилитической сыворотки, облепляет поверхность эритроцитов человека в присутствии комплемента [Нельсон (R.

Nelson), 1953]; однако и эти реакции дают иногда положительный результат у здоровых лиц и отрицательный — у больных свежими формами сифилиса; 5) реакция иммунофлюоресценции (см. Иммунофлюоресценция); антиген из патогенных бледных трепонем и сыворотка больного сифилисом образуют комплекс, к к-рому добавляют кроличью люминесцирующую сыворотку против глобулинов человека; при исследовании в люминесцентном микроскопе сыворотка больного сифилисом дает желто-зеленое свечение трепонем.

Стандартизации RW посвящено много отечественных и зарубежных работ. В СССР инструкция по постановке RW была утверждена на XI съезде бактериологов и эпидемиологов в 1928 г., пересмотрена и дополнена в 1956 и в 1973 г.

Разливка ингредиентов. Точность разливки ингредиентов имеет первостепенное значение для исхода реакции. Из предложенных аппаратов особого внимания заслуживает аппаратура А. В. Флоринского. Она состоит из следующих частей.

ПОДРОБНОСТИ:   Как сдают анализ на гормоны

1) Резиновые штативы, представляющие собой резиновые планки (9 X 23 см) с 40 отверстиями, в которые плотно вставлены 40 пробирок (14X65 мм); каждый штатив рассчитан на исследование 10 сывороток с тремя антигенами, четвертый ряд предназначен для контролей сывороток; пробирки, не вынимая из планки, моют ершом в теплой воде и просушивают в сушильном шкафу при t° 120—130°.

Разборно-планочный штатив Флоринского, заполненный пробирками: 1 — групповая автоматическая пипетка. Внизу планка с пробирками.

Разборно-планочный штатив Флоринского, заполненный пробирками: 1 — групповая автоматическая пипетка. Внизу планка с пробирками.

3) Стеклянные мерные приборы с пипетками для разливки ингредиентов, содержащие по 10 пипеток емкостью в 0,025; 0,05, 0,1; 0,15; 0,25; 0,5; 1,0 мл; после разливки каждого ингредиента приборы промывают изотоническим раствором хлорида натрия; по окончании работы — сначала водопроводной, затем дистиллированной водой.

При пользовании аппаратурой Флоринского на разливку 200 сывороток требуется лишь 20 мин.

Специфичность

Возможны положительное проявление реакции Вассермана и у здоровых людей при некоторых других, отличных от сифилиса заболеваниях (туберкулёз, системная красная волчанка, заболевания крови) и физиологических состояниях (беременность) и после родов. При малярии, туберкулезе, некоторых вирусных и протозойных заболеваниях, проказе, пемфигусе, лептоспирозе, новообразованиях, во время менструации, после наркоза, после употребления накануне взятия крови спиртных напитков, жирной пищи, лекарств, введения чужеродных сывороток тоже может быть получен положительный ответ. В таких случаях для уточнения диагноза используются другие методы (РПГА, ИФА, РИФ).

В культуре

Название «Вассерманова реакция» дал одной из своих ранних критических статей Борис Пастернак.

На телеканале НТВ утром существует передача «Реакция Вассермана»[1], которую ведёт Анатолий Вассерман.

Вассермана реакция у детей

2) при скрытом сифилисе, когда клинические проявления отсутствуют, и только серологические реакции нередко помогают диагностировать его; 3) при заболеваниях внутренних органов и нервной системы для исключения возможной сифилитической инфекции; 4) при профилактике сифилиса (обследование членов семьи больного и лиц, находившихся с ним в контакте, персонала детских учреждений, работников пищевых и коммунальных предприятий, доноров и т. д.);

RW у больных первичным сифилисом в первые 15 —17 дней заболевания отрицательна, на 5 — 6 нед. положительные результаты наблюдаются у 25% больных, к 7—8 нед.— у 75—80%, у больных вторичным свежим сифилисом R W становится положительной в 100% случаев, при вторичном рецидивном в 95 — 100% случаев, у больных скрытым сифилисом RW положительна в 40—96% случаев в зависимости от длительности заболевания, интенсивности предшествующей терапии и т. д.

Однако не всегда положительная RW указывает на наличие сифилиса. Положительную реакцию можно иногда получить и у здоровых лиц, а также при заболеваниях, при которых изменения в сыворотке крови близки к таковым у больных сифилисом. Положительные результаты RW у лиц, не страдающих сифилисом, называют ложноположительными или неспецифическими.

Ложноположительные результаты серологических реакций могут наблюдаться при заболеваниях (возвратный тиф, фрамбезия, беджель, пинта, лептоспироз и др.), обусловленных наличием общих антигенов у сходных возбудителей, — так наз. групповые реакции. При этих заболеваниях вырабатываются антитела, сходные с таковыми при сифилисе.

Ложноположительные результаты могут быть обусловлены нарушением обмена (в первую очередь липидного) и изменением в глобулинах сыворотки. Иногда наблюдаются положительные результаты R W у больных подагрой, малярией, сыпным тифом, скарлатиной, оспой, пузырчаткой, эндокардитом, при отравлениях свинцом, фосфором, хлороформом и др.

Неспецифические положительные результаты реакции иногда возникают из-за технических погрешностей при ее постановке. Отмечаются также так наз. парадоксальные реакции, когда с одной и той же сывороткой в одно и то же время в разных лабораториях получают противоречивые результаты, что объясняется применением различных ингредиентов при постановке реакции.

В наст, время, когда методики изготовления антигенов и постановки реакции унифицированы, парадоксальные реакции встречаются редко. Особенно большой процент ложноположительных результатов R W наблюдается у больных туберкулоидной лепрой (Н. А. Торсуев). Возможна положительная R W у больных системной красной волчанкой, листереллезом, железистой лихорадкой, туберкулезом, гриппом, корью, пневмонией, злокачественными опухолями в стадии распада, ангиной Плаута — Венсана, мягким шанкром, а также непосредственно после эфирного и хлороформного наркоза.

Могут наблюдаться слабоположительные и сомнительные результаты, особенно с сыворотками крови детей, при жел.-киш. расстройствах, у женщин во время менструаций, непосредственно перед и после родов. Процент ложноположительных RW у беременных в среднем ок. 2%, но некоторые авторы считают эти результаты с сыворотками беременных погрешностью лабораторной техники.

Неспецифические результаты RW описаны при взятии крови для исследования у лихорадящих больных, непосредственно после принятия обильной жирной пищи, алкоголя. Следует учитывать, что сыворотки больных подострым септическим эндокардитом обладают самозадерживающими свойствами (задержка гемолиза в контрольных пробирках основного опыта).

ПОДРОБНОСТИ:   PCT в анализе крови: норма и расшифровка результатов

Основными реакциями, которые дают возможность отличить ложноположительные реакции от реакций, обусловленных сифилисом, являются реакция иммобилизации бледных трепонем и реакция иммунофлюоресценции. Однако и они в отдельных случаях могут быть неспецифическими. Следует проявлять осторожность при оценке ложноположительных результатов реакции:

Вассермана анализ

их переоценка или недооценка могут привести к серьезным диагностическим ошибкам. В каждом конкретном случае надо учитывать клинические и серологические данные, притом проведенные повторно. Не следует переоценивать и значения определения высоты титра RW, т. к. это имеет лишь вспомогательное значение.

В оценке проводимого лечения важным показателем эффективности терапии сифилиса является переход положительных серологических реакций в отрицательные. Однако если у больных свежими формами сифилиса R W сравнительно быстро становится отрицательной, то при лечении больных поздним сифилисом негативация наступает более медленно и нередко совсем не наступает, несмотря на достаточное лечение (серорезистентный сифилис).

В этих случаях следует выяснить причины серорезистентности, привлекая к обследованию больных других специалистов (невропатологов, офтальмологов, терапевтов, рентгенологов и др.). Кроме сыворотки крови, необходимо исследование цереброспинальной жидкости. Если R W остается в них положительной, следует провести дополнительное лечение с применением одновременно неспецифических методов терапии. Если и после этого RW остается положительной, лечение прекращают и больного оставляют под клиническим и серологическим контролем.

В середине 70-х гг. в ряде стран (США, Англия и др.) оригинальной RW почти не пользуются, заменив ее быстрой реакцией на стекле с кардиолипиновым антигеном (реакция VDRL — название по начальным буквам лаборатории, в к-рой она впервые предложена) с последующей постановкой (в случае ее положительных результатов) реакции иммобилизации трепонем или реакции иммунофлюоресценции.

Вассермана реакция у детей имеет важное значение при распознавании активных форм врожденного или приобретенного сифилиса, и особенно при диагностике скрытого врожденного сифилиса. В связи с особенностями белкового спектра сыворотки крови в грудном возрасте у 3—6% детей, страдавших активным врожденным сифилисом, R W может быть отрицательной (Ю. А. Финкельштейн, М. М. Райц). Еще чаще наблюдается отрицательная R W при позднем врожденном сифилисе.

Не являясь строго специфической реакцией, RW может быть положительной при других заболеваниях (скарлатина, инфекционный мононуклеоз, эозинофильный легочный инфильтрат, некоторые формы пневмонии, системная красная волчанка, малярия, при увеличении в крови количества патологических глобулинов, иногда после противооспенных прививок или прививок коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакциной).

Вассермана анализ

Неспецифическая положительная R W может возникнуть через 7— 10 дней после рождения. В таких случаях необходимо повторное серологическое исследование через месяц после рождения и тщательное клиническое обследование.

У некоторых детей, родившихся от матерей с положительными RW, достаточно леченных по поводу сифилиса, возможен пассивный перенос сифилитических реагинов от матери. Если ребенок здоров, то обычно через 2—5 мес. RW постепенно становится отрицательной.

В результате лечения пенициллином у подавляющего большинства детей, больных активным врожденным или ранним скрытым врожденным сифилисом, RW постепенно становится отрицательной. Значительно медленнее это явление происходит у детей, больных рецидивным приобретенным сифилисом или поздним врожденным сифилисом. У части таких детей RW длительное время остается стойко положительной.

См. также Реакция связывания комплемента.

Библиография: Бухарович М. Н. Серо-резистентний сифш1с (Патогенез, лшуван-ня, профшактика), Кшв, 1971, библиогр.; Овчинников H. М. Серологические исследования при сифилисе и гонорее, М., 1958, библиогр.; Овчинников H. М. и Сазонова Л. В. Серодиагностика сифилиса, в кн.: Унифицированные методы клин. Лаборат, исследований, под ред. В. В.

Меньшикова, в. 4, с. 193, М., 1972; Райц М. М. Врожденный сифилис, Многотомн, руководство по дерм, и вен., под ред. С. Т. Павлова, т. 1, с. 308, М., 1959, библиогр.; Резникова Л. С. Кардиолипиновые антигены в серодиагностике сифилиса, Сов. мед., № 1, с. 40, 1953; Торсуев Н. А. Лепра, М., 1952; Финкельштейн Ю. А.

Вассермана анализ

Серодиагностика сифилиса, венерических и кожных болезней и их иммунотерапия, М.— Л., 1930, библиогр.; Gertler W. Systematische Dermatologie und Grenzge-biete, Bd 2, Lpz., 1972; Gumpesber-ger G. Die Lues connata, в кн.: Dermatol. u. Venerol., hrsg. v. H. A. Gott-ron u. W. Schonfeld, Bd 5, T. 2, S. 9 75, Stuttgart, 1965, Bibliogr.; W asser-m a n n A., N e i s s e r A. u. B r u с k C. Eine serodiagnostische Reaktion bei Syphilis, Dtsch. med. Wschr., S. 745, 1906.

Adblock detector