Получение сыворотки крови для лабораторных исследований

Факторы, влияющие на состав крови

При проведении лабораторных исследований крови необходимо строго соблюдать условия отбора биологических образцов, а также предпринимать меры для противодействия деградации полученных материалов и активного вещества, содержащегося в них.

Каждый медицинский работник должен знать и предупреждать пациента о том, что в крови:

  1. сразу после приема пищи может существенно повышаться концентрация гормонов и некоторых других биологических веществ;
  2. для ряда компонентов присуще наличие суточных (циркадных) колебаний уровня;
  3. прием большинства препаратов тем или иным способом влияет на концентрацию определяемого вещества;
  4. положение пациента (горизонтальное или вертикальное) или воздействие физической нагрузки непосредственно перед отбором образцов для анализа способно отразиться на уровне исследуемых компонентов, увеличив или уменьшив их концентрацию более чем на 10%.

Лабораторная центрифуга С2004

Лабораторная центрифуга С2004

Предпочтительно отбирать образцы крови, предназначенные для дальнейших исследований, сразу в центрифужные пробирки. Подготовка тары (мойка, сушка, добавка ингибиторов ферментов или коагулянтов) должна производиться одним специалистом. Собранная кровь, в которую не вносились добавки, оставляется для отстоя, а модифицированная помещается в многофункциональную настольную центрифугу, где отделяется сыворотка или плазма. Полученный исследовательский материал разливается в более мелкую пластиковую или стеклянную тару. Количество пробирок с образцами должно равняться или превышать число предстоящих разновидностей анализов.

https://www.youtube.com/watch?v=ytpolicyandsafetyru

При отборе биологического материала необходимо учитывать, что секреция многих веществ в организме происходит с определенной цикличностью, которая может составлять от нескольких минут до суток. Определять результаты анализов без учета временного фактора и фактического физиологического состояния организма некорректно.


Изображение процесса гемолиза

Изображение процесса гемолиза

Непосредственно процесс забора крови должен проходить так, чтобы был исключен гемолиз, который происходит при продолжительном венозном застое, создании избыточного разрежения в шприце, попадании в канал иглы детергентов или воды, воздействия низких и высоких температур.

Литература

  1. Аристовский
    В.М. др. Учебник медицинской микробиологии.
    — М: Медгиз, 1949.

  2. Справочник
    по микробиологическим и вирусологическим
    методам исследования. Под ред. Биргера
    М.О, — М: «Медицина», 1982.

  3. Лабинская
    А.С. Микробиология с техникой
    микробиологических исследований. —М.:
    «Медицина», 1978.

  4. Методы
    общей бактериологии в 3-х т. — М:, «Мир»,
    1983.

  5. Розанов
    Н.И. Микробиологическая диагностика
    заболеваний сельскохозяйственных
    животных. — М:, ГИСХИ. 1952.

  6. Сидоров
    М.А., Скородумов Д.И., Федоров В.Б.
    Определитель зоопатогенных микроорганизмов.
    — М.: «Колос», 1995.

  7. Тимаков
    В.Д., Гольдфарб Д.М. Основы экспериментальной
    медицинской бактериологии. — М.: Медгиз,
    1958.

Выделение плазмы или сыворотки


Выделенная плазма (сверху)

Выделенная плазма (сверху)

Цельная кровь, как венозная, так и капиллярная, используется при проведении биохимических исследований (определение концентрации электролитов в эритроцитах, уровня глюкозы и показателей КЩР), а также гематологии (стандартный клинический анализ, проверка на малярию, проверка гематокрита и LE-клеток). Радиоиммунные и иммуноферментные методы предусматривают выделение плазмы или сыворотки.

Среди специалистов не сформировано единого мнения по поводу того, что лучше подходит для анализа – сыворотка или плазма. Например, для биохимического исследования чаще берут сыворотку венозной крови. Аргументами «за» в таких случаях выступает тот факт, что стероиды в этом случае экстрагируются легче и полнее. Также отмечается, что плазма чаще образует эмульсию с органическими растворителями, а при оттаивании после заморозки в ней могут появляться фибриновые хлопья.

Также при выборе конкретного материала следует принимать во внимание следующие объективные факторы:

  1. При выделении сыворотки существует опасность, что в процессе отстаивания крови из эритроцитов активно выделяются протеолитические ферменты, способные разрушить определяемое вещество, а также повредить его меченый аналог при инкубировании. С учетом данного момента рекомендуется готовить плазму для определения концентрации белковых соединений.
  2. Получение плазмы часто предусматривает применение цитрата или гепарина. Первый оказывает существенное влияние на кислотность среды, к чему весьма чувствительны отдельные вещества, а второй препятствует связыванию антигена с антителом. Чтобы избежать негативного влияния, в сухую пробирку, в которой будет производиться центрифугирование, стоит добавить 50 мг этилендиаминтетрауксусной кислоты на 5 мл крови. Сразу после забора кровь перемешивается с ЭДТА для получения смеси в пропорции 1:100. Кислота является блокатором протеолитических ферментов, слабым антикоагулянтом, а также входит в состав различных буферных смесей.

В большинстве случаев для проведения анализов считается допустимым использование материала, хранившегося при комнатной температуре не более 8 часов. При охлаждении образцов до температуры 4°С их допускается выдерживать в течение недели. Если биологический материал подлежит длительному хранению, то необходима его глубокая заморозка до температуры -20°С. Это позволит провести анализ на раковые маркеры, холестерин, мочевину, многие гормоны даже спустя несколько месяцев.

Вернуться к списку

для
иммунохимических исследований

Оглавление

Введение 3

Получение сыворотки крови для лабораторных исследований

Бактериологическая
лаборатория 3

Помещение бактериологической лаборатории
и оборудование рабочего места 4

Правила работы и поведения в лаборатории 7

Уборка лабораторного помещения 8

Мытье
и обработка лабораторной посуды 9

Дезинфекция 13

Стерилизация 14

Подготовка и стерилизация лабораторного
оборудования 14

Виды стерилизации 16

Микроскопические
методы исследования 21

Приготовление препаратов для микроскопии
живых микроорганизмов 21

Приготовление мазков 26

Окраска мазков 28

Получение сыворотки крови для лабораторных исследований

Простые методы окраски мазков 31

Окраска
по Муромцеву 31

Сложные (дифференциальные) методы
окраски мазков 32

Окраска
по Граму 32

Видоизменения метода окраски по Граму 34

Окраска
по Граму в модификации Хукера. 35

Окраска
по Граму в модификации Берка. 36

Модификация
по Синеву. 38

Модификация
по Эткинсу. 39

Окраска кислотоустойчивых микробов 40

Окраска
по методу Циль-Нильсена 40

Получение сыворотки крови для лабораторных исследований

Метод
Труанта для окрашивания на
кислотоустойчивость. 41

Метод
Гонзеля 42

Метод
Бунге и Траутенрота 43

Окраска
по Вейксельбауму (на спиртоустойчивость) 43

Окраска
по Грам-Муху (на грамофильную
зернистость) 43

Получение сыворотки крови для лабораторных исследований

Способ
Нейссера 44

Метод
Пью (окраска метахроматических зерен) 44

Окраска
по Романовскому-Гимза 45

Окраска капсул 46

Метод
окраски капсул по Дюгиду 46

Метод
окраски капсул по Гиссу 46

Метод
окраски капсул по Антони 47

Получение сыворотки крови для лабораторных исследований

Способ
Михина 47

Способ
Гисса 47

Способ
Ольта 48

Способ
Ребигера 48

Способ
Гусельниковой 48

Получение сыворотки крови для лабораторных исследований

Способ
Кауфмана 49

Способ
Ионе 49

Окраска спор 49

Метод
окрашивания эндоспор по Дорнеру 50

Метод
окраски эндоспор по Шефферу–Фултону 51

Метод
Виртца в модификации Саватеева 51

Способ
Пешкова 52

Способ
Мюллера 52

Способ
Ауески 53

Способ
Клейна 53

Окраска жгутиков 54

Метод
окраски жгутиков по Грэю 55

Метод
окраски жгутиков по Ляйфсону 56

Окраска
жгутиков серебрением 57

Способ
Уварова 59

Способ
Леффлера 59

Способ
Инуйе 60

Способ
Бениньетти и Джино 60

Цитоплазматические включения 60

Окрашивание
поли-β-оксимасляной кислоты 61

Окрашивание
полифосфата 61

Окрашивание
полисахаридов с использованием реак­тива
Шиффа 61

Метод
окраски полисахаридов альциановым
синим 62

Питательные
среды 63

Техника
посева микроорганизмов 70

Техника
посевов на плотные и жидкие питательные
среды 72

Получение чистых культур 74

Посев
штрихом 75

Получение
чистой культуры методом рассева в
глубине среды (по Коху) 76

Выделение
чистой культуры по способу Дригальского 77

Анаэростат
для культивирования анаэробов 77

Методы,
позволяющие изучить культуральные
свойства микроорганизмов 77

Рост микробов на плотной питательной
среде 77

Особенности микробного роста на жидких
питательных средах 80

Рост на полужидкой питательной среде 81

Методы
изучения биохимических свойств
микроорганизмов 81

Сахаролитические
свойства микроорганизмов 82

Протеолитические
свойства микроорганизмов 83

Определение
индола в культуре микроор­ганизмов 85

Определение
сероводорода 85

Окислительно-восстановительные свойства
микроорганизмов 85

Определение
редуцирующей способности 86

https://www.youtube.com/watch?v=upload

Определение
фермента каталазы 86

Определение
чувствительности микроорганизмов к
антибиотикам 87

Лабораторные
животные 89

Краткие сведения о содержании, разведении,
кормлении и заболеваниях лабораторных
животных 90

Правила
пополнения вивария новыми животными 91

Правила
содержания экспериментальных животных
в ви­варии 93

Уборка
и дезинфекция вивария 97

Личная
гигиена работников питомника (вивария) 98

Правила
кормления лабораторных животных 98

Заболевания лабораторных животных 100

Подготовка животных к заражению 102

Фиксация, методы заражения и взятия
крови у лабораторных животных 106

Способы заражения 110

Наркоз
лабораторных животных 110

https://www.youtube.com/watch?v=https:accounts.google.comServiceLogin

Внутрикожный
метод 111

Подкожный
способ заражения 111

Внутримышечный
способ заражения 112

Внутрибрюшинный
способ заражения 112

Внутривенное
заражение кроликов 112

Внутривенное
заражение крыс и мышей 113

Заражение
через пищеварительный тракт 113

Заражение
через дыхательные пути (интраназальное
зара­жение) 115

Заражение
в переднюю камеру глаза (интраокулярный
метод) 115

Внутримозговой
метод (интрацеребральный) 115

Внутриплевральный
метод 116

Содержание
животных под опытом 116

Взятие крови у лабораторных животных
и ее обработка 116

Умерщвление
и вскрытие лабораторных животных 120

Вскрытие животных 121

Определение
вирулентности микробов 124

Определение
токсигенности микробов 125

Литература 126

Дмитрий
Аркадьевич Васильев
Сергей Николаевич
Золотухин

Анатолий
Анисимович Щербаков

Лидия
Владимировна Карпунина

Подготовка крови к проведению лабораторных исследований

Отобранный образец крови должен быть доставлен в лабораторию и обработан или подвергнут анализу в кратчайшие сроки. Продолжительное нахождение сыворотки над эритроцитами способно приводить к изменению концентрации компонентов и, соответственно, искажению результатов. Также необходимо учитывать, что период биологического полураспада ряда исследуемых веществ при нахождении образца под воздействием комнатной температуры крайне непродолжительный.


Медицинская центрифуга PrO-Hospital GP6

Медицинская центрифуга PrO-Hospital GP6

На первом этапе обработки с помощью сухой чистой стеклянной палочки производится аккуратное отделение сгустка крови от стенок пробирки и взвешивание емкости. Затем образец помещается в центрифугу для медицинских учреждений, работающую в подходящем скоростном диапазоне. В большинстве случаев обработку образцов крови при подготовке к исследованиям рекомендуется проводить при температуре 4°С, скорости вращения 1500 – 3000 об/мин, перегрузках от 500 до 1000g в течение 15-20 минут. Более высокая скорость вращения ротора может привести к гемолизу плазмы или сыворотки.

Выделенную сыворотку или плазму следует оперативно отделить от других элементов крови, после чего плотно закрыть пробирки крышками. Испорченные образцы подлежат утилизации.

Рост микробов на плотной питательной среде

Получение сыворотки крови для лабораторных исследований

Для
изуче­ния свойств колоний микробы
культивируют на плотных пи­тательных
средах в чашках Петри. При посеве
материала стараются получить изолированный
рост колоний. Чашки с посевом просматривают
сначала невооруженным глазом или через
лупу, затем помещают их на столик
микроскопа вверх дном и просматривают
колонии в проходящем свете с объ­ективом
малого увеличения и с суженной диафрагмой.

https://www.youtube.com/watch?v=ytcreatorsru

Колонии
характеризуют по величине, форме, контуру
края, рельефу, поверхности, цвету,
структуре и консистенции.

Величина
колонии
определяется ее диаметром. В за­висимости
от диаметра различают колонии точечные
(диа­метр меньше 1 мм), мелкие (диаметр
1—2 мм), средние (диаметр 2—4 мм) и крупные
(диаметр 4—6 мм и более).

Форма
колонии
бывает правильная — круглая, непра­вильная
— амебовидная, ризоидная — корневидная,
напоминающая переплетающиеся корни
деревьев.

Характер
контура края
определяют при рассмотрении колонии
под лупой или микроскопом с малым
увеличением. Различают ровные края в
виде четко выраженной ли­нии и неровные.
Последние делят на:

  1. фестончатый
    край, состоящий из крупных, слегка
    округ­лых или уплощенных зубцов
    правильной формы;

  2. волнистый край,
    который несколько отличается от
    фе­стончатого тем, что крупные зубцы
    его выражены нечетко;

  3. эрозированный,
    или зазубренный, край, состоящий из
    острых зубцов различной величины и
    формы;

  4. бахромчатый
    край, имеющий нежные ворсинки. В некоторых
    случаях четко выраженная линия,
    отграни­чивающая колонию от поверхности
    среды, отсутствует. Такой край колонии
    называется расплывчатым.

Рельеф
колонии характеризуется приподнятостью
ее над поверхностью питательной среды
и контуром формы в вертикальном разрезе.
Определяется рельеф колонии нево­оруженным
глазом или с лупой при рассматривании
сверху и сбоку. Различают:

  1. каплеобразные
    и куполообразные колонии правильной
    круглой формы с различно выраженной
    степенью выпукло­сти, которые в
    вертикальном разрезе представляют
    собой сегмент шара и отличаются только
    длиной радиуса. Коло­нии слабовыпуклые
    имеют большую длину радиуса; куполо­образные
    — меньшую;

  2. колонии
    плоско-выпуклые с плоским верхом,
    пологими или круто обрывающимися
    краями; имеют в вертикальном разрезе
    форму трапеции;

  3. колонии
    конусообразные, имеющие в вертикальном
    разрезе форму треугольника:

  4. колонии
    с приподнятой в виде соска серединой
    и ва­ликом по периферии;

  5. колонии с вдавленным
    центром;

  6. колонии плоские,
    стелющиеся по поверхности среды.

Поверхность
колонии изучают с помощью лупы или под
микроскопом при малом увеличении.
Поверхность коло­ний бывает матовая
или блестящая с глянцем, сухая или
влажная, гладкая или шероховатая. Гладкие
колонии обозна­чают буквой S (smooth),
шероховатые — буквой R (rough), что означает
соответственно «гладкий» и «шероховатый».

Ме­ханизм формирования гладких и
шероховатых форм колоний обусловлен
различием процессов клеточного деления.
Мик­робные клетки в колониях S-форм
располагаются, соприка­саясь своими
боковыми поверхностями, клетки R-форм,
сохраняя при делении цитоплазматические
мостики, об­разуют цепочки, которые,
накладываясь друг на друга, об­условливают
шероховатую поверхность и неровный
край колонии.

Цвет
колонии
определяется пигментом, который
проду­цирует культура микробов.
Преобладающее большинство патогенных
бактерий пигмента не образуют, вследствие
чего колонии их бесцветны или
молочно-мутного цвета, похожи на опал.
В проходящем свете такие колонии в
большей или меньшей степени прозрачны.
Пигментообразующие виды мик­робов
дают колонии различных цветов: кремовые,
желтые, золотисто-оранжевые, синие,
красные, сиреневые, черные и др.

Структура
колоний
определяется в проходящем све­те при
слабом увеличении микроскопа, суженой
диафрагме или при несколько опущенном
конденсоре. У пигментирован­ных
колоний и колоний, не пропускающих
света, она не опре­деляется.

По
характеру структуры различают следующие
виды ко­лоний:

  1. гиалиновые —
    бесцветные, прозрачные, без видимой
    определенной структуры;

  2. зернистые,
    которые в зависимости от величины зерен
    разделяются на мелко- и грубозернистые;

  3. нитевидные
    или волокнистые, характеризующиеся
    на­личием длинных, густо переплетающихся
    нитей в толще ко­лонии.

Получение сыворотки крови для лабораторных исследований

Колонии
бывают однородные и неоднородные.
Строение первых одинаково во всех
частях, у вторых центральная часть
отличается от периферической или
отдельные сектора имеют строение,
неодинаковое с остальной массой.

Консистенцию
колонии,
определяющую ее физиче­ское состояние,
исследуют посредством прикосновения
или взятия из нее части материала
бактериальной петлей. По характеру
консистенции колонии бывают:

  1. пастообразные,
    легко снимающиеся и размывающиеся по
    поверхности питательной среды наподобие
    сливочного масла;

  2. вязкие
    или слизистые, прилипающие и тянущиеся
    за петлей;

  3. волокнистые
    или кожистые, плотные, снимающиеся с
    поверхности питательной среды в виде
    упругой пленки, соот­ветствующей
    величине и форме колонии;

  4. хрупкие,
    сухие, рассыпающиеся при прикосновении
    петли.

Adblock detector